隔离

单核细胞分离，分化和刺激方案

用提供的洗涤缓冲液 (PBS + 0，05% BSA和2毫米EDTA，ph7.4) 洗涤样品材料两次，以减少可溶性CD14。将用于分离单核细胞的pluriBead CD14添加成熟树突状细胞CD14a+的荧光分析到样品管中，并在pluriPlix或擦拭滚动混合器上孵育20分钟。

分离后，将细胞重悬于1ml的rpmi1640-培养基 (+ 10% FCS和1x Pen/Strep) 中，并确定细胞数量。对于在24孔细胞培养板中培养单核细胞，每孔使用1百万个细胞，并与1ml单核细胞培养基 (RPMI 1640 + 10% FCS，1x Pen/Strep，2000 U/ml gm-csf和200 U/ml IL-4) 在37 °C和5% 二氧化碳的条件下。

24小时后，除去培养基并加入1ml新鲜的单核细胞培养基。然后，将细胞再培养4天。共5天后，用100ng/ml LPS再刺激细胞24h。然后用胰蛋白酶除去活化的细胞，并通过CD1a，CD14和cd83的荧光分析检测单核细胞向树突状细胞的成熟率。