循环肿瘤细胞罕见细胞类型的分离：CTC

介绍

在这里，我们提出了一种使用携带肿瘤相关 EpCAM 抗体的 pluriBead® 进行结肠癌循环肿瘤细胞 （CTC） 筛查的新方法。

该方法基于非磁性细胞分离技术。它不需要任何样品预处理。EpCAM-pluriBead® 可以直接添加到全血样本中。该方法也适用于从不同生物体液中分离单细胞。此外，可以通过增加样品量来额外提高其灵敏度。结合的 EpCAM 阳性结肠癌细胞可以很容易地参与旨在检测其突变状态的进一步分子遗传学实验。在结肠癌的情况下，K-ras突变状态是抗癌治疗反应的预测工具。因此，新方法可以被认为是早期癌症诊断的一种快速有效的工具。

标签 将 EpCAM-pluriBead® 添加到您的样品中	混合 温和孵育 30 分钟（建议与 pluriPlix® 一起使用）。	隔离 捕获的靶细胞通过适当的筛子分离。	洗涤 使用洗涤缓冲液清洁筛子。用 Trizol® 裂解细胞。	CTC加工 癌细胞研究方法： – RNA/DNA 分离 – 细胞培养实验

结果

图1a和1b：Caco-2细胞的流式细胞术分析，用抗EpCAM-PE染色。

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图4a：PCR方法检测已知数量的刺突Caco-2细胞中K-ras质子基因的灵敏度。

图4b：EpCAM-pluriBead®捕获的EpCAM和CK 20 mRNA的RT-PCR产物（作为阴性对照，使用来自全血的mRNA）。

结论和观点

在这里，我们开发了一种使用 EpCAM-pluriBead® 检测血液中循环结肠肿瘤细胞的新方法。捕获的细胞适用于特定标志物的进一步分子遗传学筛选，与肿瘤形成有关。开发的“原位免疫珠pcr”方法不需要初步的RNA/DNA分离，可以有效节省分析时间。这项工作的进一步目的是提高提高样品量、改变细胞肿瘤系和/或抗体特异性的方法的灵敏度。