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最大限度地减少RNA表达和蛋白质分析中的假象

最大限度地减少 RNA 表达和蛋白质分析中的伪影

基于微阵列的外周血分析已成为生命科学和临床研究的重要因素。然而,在实验室和临床环境中应用基因表达和蛋白质分析需要仔细考虑样品处理的影响,从而考虑 RNA 和蛋白质质量表达谱结果的影响。

采集血样后细胞的RNA和蛋白质谱不稳定。它们会受到时间、温度刺激和离心等条件的影响,这些条件在您的分析中以伪影的形式可见。

对于全血分析,该主题已通过使用 PAXgene® (PreAnalytix)、Tempus® 血液 RNA(Applied Biosystems)等解决。这有助于全局分析。但是,在观察特定人群时,您会怎么做?目前的细胞分离方法可能需要长达两个小时,并且需要多个离心步骤和温度变化。

使用 pluriBead 试剂盒,您可以直接从全血中分离特定细胞类型。您可以在室温下(甚至在 37°C)下工作,无需离心,并在不到 10 分钟的时间内稳定 RNA 和蛋白质。这将最大限度地减少分析中的伪影。

pluriBead® 细胞分离方案以及随后的 RNA 稳定


1将 pluriBead® 添加到样品中

2孵育 4 – 10 分钟(见下文)

3将样品添加到分离设备上

 清洗并丢弃漏斗,清洗 pluriStrainer®
5关闭 Luer-Lock 并添加裂解缓冲液

6



将裂解的细胞转移到新鲜的反应管上

数字

8pluriSelect (PLS) 与色谱柱技术的比较


9





















安捷伦 (R) RNA 完整性分析




10




7流式细胞术分析

产量和推荐孵育时间

原代细胞
(1×10
7细胞)
总 RNA (μg)mRNA(微克)
推荐 pluriBeads 8ml 全血孵育时间
小板 (CD9+)0.025
1 毫升 M-pluriBead4 分钟
粒细胞 (CD15+)20.05
300μl M-pluriBead4 分钟
B细胞(CD19+)100.4
300μl S-多珠10 分钟
单核细胞 (CD14+)201.0
300μl S-多珠7 分钟
T 细胞 (CD3+)181.0
300μl S-多珠7 分钟
T 辅助细胞 (CD4+)150.6
300μl S-多珠7 分钟
细胞毒性 T 细胞 (CD8+)170.8
300μl S-多珠7 分钟

经过测试的裂解缓冲液

我们使用以下缓冲液测试了该协议:Trizol®、Qiagen RLT® 缓冲液、Promega 裂解缓冲液、Invitek 细胞裂解缓冲液、Ambion 裂解缓冲液、PAXgene®、RNAlater®。

与使用 pluriBead 进行标准细胞分离有何不同?

如果您想使用靶细胞进行 RNA 表达分析,则无需将它们与 pluriBead 颗粒分离。只需添加合适的裂解缓冲液并按照下游实验的方案进行作即可。